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酶聯(lián)免疫吸附法
  • 發(fā)布日期:2020-03-11      瀏覽次數:1151
    • 原理:可用于測定抗體,也可用于檢測杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反響將待測物與酶連接,然后通過(guò)酶與底物發(fā)生顏色反響,用于定量測定。酶聯(lián)免疫吸附法測定的對象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑: 

      ①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); 

      ②酶符號的抗原或抗體(符號物); 
      ③酶效果的底物(顯色劑)。

      ELISA進(jìn)程包括:抗原吸附在固相載體上,這個(gè)進(jìn)程稱(chēng)為包被,加待測抗體, 再加相應酶符號抗體,生成抗原--待測抗體--酶符號抗體的復合物,再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品。借助分光光度計的光吸收核算抗體的量。

      依據檢測意圖和操作過(guò)程不同,有以下三種類(lèi)型的常用辦法:

      a、間接法  

      此法是測定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標本(含相應抗體)與之結合。洗刷后,加人酶標抗球蛋白抗體(酶標抗抗體)和底物進(jìn)行測定。

      b、雙抗體夾心法  

      酶聯(lián)免疫吸附法此法常用于測定抗原。將已知抗體吸附于固相載體,加人待檢標本(含相應抗原)與之結合。溫育后洗刷,加人酶標板中。

      c、競爭法  

      此法可用于抗原和半抗原的定量測定,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體。參加待測抗原和一定量的酶標已知抗原,使二者竟爭與固相抗體結合;通過(guò)洗刷分離,zui后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關(guān)。

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