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PCR實(shí)驗原理
  • 發(fā)布日期:2023-07-14      瀏覽次數:1285
    • 原理:

      PCR利用DNA聚合酶的催化作用,在高溫下依次完成DNA的變性、引物結合和DNA合成等反應,從而使DNA序列得到擴增。PCR的核心是引物,其能夠與目標DNA序列的特定區域互補配對,使得DNA聚合酶能夠選擇性地合成引物兩側的DNA分子,從而擴增出目標DNA序列。

       

      操作過(guò)程:

      1. DNA模板的制備:將目標DNA提取出來(lái),使其成為PCR反應的模板。

      2. 引物的設計:根據目標DNA的序列設計引物,以便在PCR反應中能夠引導DNA擴增。

      3. PCR管中的混合溶液制備:將模板DNA、引物和PCR反應所需的其他試劑加入混合溶液管中,包括四種dNTP(脫氧核苷酸三磷酸)、

      4. PCR反應條件的設置:旋轉電風(fēng)扇調節樣品表面溫度,通透底膜PC管蓋與PC反式培養皿卡合,自動(dòng)調節樣品超高速溫升和降溫速率,確保PCR反應條件的恒定性。

      5. PCR反應的進(jìn)行:將PCR反應管放入PCR儀中,反應程序根據需要進(jìn)行多次循環(huán),在每一個(gè)循環(huán)中,反應管中的溫度會(huì )在一定的溫度區間中不斷變化,使引物與目標DNA互補結合,DNA鏈變性,然后DNA聚合酶開(kāi)始合成新DNA鏈來(lái)擴增目標序列,完成DNA擴增和PCR反應。

      6. PCR反應產(chǎn)物的檢測和分離:反應結束后,可以通過(guò)凝膠電泳等技術(shù)檢測PCR反應產(chǎn)物,分離目標DNA擴增產(chǎn)物,進(jìn)行后續的研究和分析。

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